概要
車掌(主人公)が隊長を務め、魔導列車「ミストトレイン」に乗ってイリスクラウド大陸各地を巡って人々の脅威である魔物「ミストモンスター」と戦い、そのミストモンスターを生み出す霧「幻霧」を晴らす手がかりを探す事を目的とする連合軍組織「特別鉄軌隊(通称：特鉄隊)」に所属するイリスクラウドの5つの主要国、及び地下世界イリスメトロの５つの主要国の軍隊から派遣された軍人である少女、及び女性たち。トレインナイトの中には軍属ではない者や異世界から来た者なども存在する。
多種多様な種族の人物が在籍し、特殊な能力の持ち主も少なくない。単に身体能力が高いだけの者もいるが、超正確な占術が特技の者や、禁断の古代魔法や超高練度の呪術を扱える者、果てにはその気になれば全世界に及ぶ常識改変ができる者も…
彼女達トレインナイトは幻霧に抗する魔力を持っており、その魔力の源であるマナ的な要素「鉄分」を車掌(主人公)の身体に触れあう事で得る事ができ、より密接に車掌と触れ合う事で多くの鉄分を得る事が可能。トレインナイトと車掌が密接に触れ合うこの行為を「鉄分注入」と呼ぶ。
一部登場人物とコラボキャラクターは除くが、トレインナイト達と登場人物の名前は実在する世界各地の鉄道の駅の名前や駅に関係する場所、地名が由来になっており、そのキャラの外見や設定に駅と場所、地域に関する話が盛り込まれている。
生まれや育ちに重い経緯がある者は少なくない（母の日の季節ボイスにおいて、母が既に他界しているトレインナイトがそれを明かすことも…）。特に一見ロリ、もとい小柄なトレインナイトはだいたいえげつない過去を抱えている…必ずではないが。
…とか言ってたら母そのものが登場するとは。
トレインナイトの武器は大きく分けて9種類あり、
剣、斧、魔具は刃属性、槍、弓、銃は貫属性、拳、鞭、杖は衝属性。
ベースキャラによって武器種は固定されており、レイヤーによって獲物は変わる場合もある（キングスクロスのビーチボール（魔具）や、シュティアのドリル（剣））が武器種は変わらないのである。
…と思いきやコラボにて例外が登場。後にトレインナイト側にも武器種が複数あるキャラが登場したので要チェックだ。
更にその中で魔具、銃※、杖は魔法武器、それ以外が物理武器となる。
（※リリース当初の銃は物理武器だったが、ホノルル登場以降は魔法武器として統一し差別化されている）
この属性傾向はほとんどすべてのスキル攻撃にも影響し（フォンテーヌなどの例外あり）、
武器属性や物/魔をしっかりまとめてやれば自ずとリンクスキルで指定される条件を満たしやすくなる。
レイヤーについて
レイヤーはA、S、SSの3種類のレアリティがあり、当然と言うか後者であるほうが強力。
とはいえ攻撃力等を永続的に上げる「ウェポンマスターレベル」はレイヤー数が多いほどたくさん上げられる他キャラストーリーは各レイヤー毎に存在しているので、よく知りたい人は色々なレイヤーを集めよう。EXシナリオもお見逃しなく。
ちなみに衣装変更機能でキャラの立ち絵やクエストでのSDキャラの外見を変更することも可能だ（ただしSSレイヤーの場合Sスキルのアニメが省略され、汎用モーションになるので注意）。
※仕事絵
その着せかえ専用のスキンも一部キャラで販売されており、
イラストはホーム画面で設定する事もできるぞ。
Aレイヤー
低レアリティのレイヤーで、基本的に各国の軍服を着用している。
メインシナリオでヌルヌル動いたりする、アニメーションレイヤーの側面もある。
それ故アニメーション担当の方々？の作画であるが故に、
S以上のレイヤーや寝室で別人のように容姿が変わるキャラや、
（胸囲的な意味で）S以上と比べてでっかく描かれる（逆も然り）キャラもいたりする。
またイベントシナリオでもPTスキル絵以外ではこのレイヤー立ち絵で描写されることも。
特鉄隊一期生であるクインズウェイ、プトラ、ヤクーツク、ヨシノ、ヴィヴィアンのものは最初から所有済み。
また恒常ガチャで様々なキャラのものが手に入るほか、
トレーニングイベントや降魔の祭壇イベントで入手できるものも。
一方で、限定ガチャでないと入手不可能なAレイヤーもあるのが悩みのタネ（復刻を待つしかない）。
Aレイヤーは汎用的な立ち絵のレイヤーであるだけあって基本的にはキャラ毎に1つのみとなっている。そのAレイヤーの実装がとてつもなく遅かったキャラも（バトゥのAレイヤーはSレイヤー初登場からなんと3年以上後に実装された）。
Sレイヤー
Aレイヤーよりも入手が困難で、一回り強いレイヤー。とはいえSSレイヤーには敵わない。
服装はAレイヤーの軍服の発展形だったり、SSレイヤー衣装の別バージョン、
季節モノの衣装など様々。Aで軍服を着用してないキャラはSレイヤーで着ている場合もある。
また特鉄隊一期生の5人には衣装交換なものも存在している。
なおS以上のレイヤーはA以下のイラストとは違い各イラストレイヤーが描かれているので、
Aレイヤーとは雰囲気がべらぼうに変わるキャラもいなくはない。
ちなみにSDキャラのモーションはS以下は基本的に共通となっている。
レイドイベントやトレジャーイベントで入手できるほか、
ガチャでもSSよりは入手しやすい傾向にある。10連なら1つはSレイヤー確定。
PU対象にSがない場合は意味はないが…むしろAとSSのみの場合は邪魔になるので注意。
（※10連のS以上確定枠でもSS排出率は据え置き。S狙いなら好都合なのだが…）
限定ガチャでのみ入手できるものは少なくないため、復刻を狙うのも大変である。
中にはシリアルコードでのみ入手できるものも（一部はプレミアムガチャで入手可となった）。
AとSSはあってSがないキャラもいる（SSのみあってS以下は未実装なキャラがいた時期も）。
過去イベントのS以下レイヤーは「討伐依頼」で入手できる討伐勲章で交換できるぞ。
SSレイヤー
ズバリ最高レアリティ。メイン戦力。ホーム画面でヌルヌル動くやつ。
戦局を変えるかもしれない「スペシャルスキル」、条件を満たして飛び抜けた効果を発揮する「リンクスキル」、更に先を征く「限界突破」などなど強力な要素が目白押し。
ぶっ飛んだアビリティを持ったSSレイヤーが登場する事もあり（お知らせではリンクスキルは開示されるが、アビリティは実装されるまで未オープンの傾向にある）、高難易度クエストでは必須レベルの戦力を誇るぞ。
服装はまさしく「勝負服」といった感じで、季節モノの衣装も少なくない。
SDキャラの待機・勝利ポーズもSSはレイヤー毎に違うユニーク仕様だ。
キャラシナリオもS以下は4つの中でSSは5つ。特にX指定版では寝室が2つあるのでオイシイ。
ただ強力である分、ピックアップ指定レイヤーでも排出率1％程度と入手難易度もひとしお。
100回ガチャを回して出ればいい方である。運が悪いと200回回しても出ない事も…
なお、SSレイヤーが複数あるキャラが居る一方で、SSレイヤーのみ未実装というキャラも居た（現在は一部コラボキャラのみSS未実装が存在している）。
コラボトレインナイト一覧
コラボキャラもイリスクラウド（イリスメトロ）主要国のいずれかに所属することとなっており、
S以上の高レアレイヤーは基本的に所属国の制服を（アレンジして）着用している。
2023年11月のアップデートで所属国が一律「その他」扱いに変更された。
（対魔忍コラボ第2段で一部キャラが複数制服持ちとなるためと思われる）
コラボキャラを確認する際は要注意。
まじこいコラボキャラクター
【種族：人間 武器：拳 制服：セントイリス】
【種族：人間 武器：剣 制服：セントイリス】
【種族：人間 武器：拳 制服：ニシキ】
【種族：人間 武器：槍 制服：フレイマリン】
【種族：人間 武器：剣 制服：ヴェルフォレット】
【種族：人間 武器：拳 制服：アイゼングラート】
対魔忍RPGコラボキャラクター
※はコラボ第2段での追加。
【種族：人間 武器：拳/剣※ 制服：ニシキ/セントイリス※】
【種族：人間 武器：銃/拳※ 制服：ニシキ/アイゼングラート※】※同名同枠で未来の姿が登場。
【種族：人間 武器：剣 制服：ヴェルフォレット】
【種族：人間 武器：剣 制服：セントイリス/フレイマリン※】
【種族：人間と鬼のハーフ 武器：拳 制服：フレイマリン/ニシキ※】※同名同枠で未来の姿が登場。
【種族：魔族＊ 武器：斧(大鎌) 制服：アイゼングラート/ヴェルフォレット※】
【種族：人間 武器：魔具(爪) 制服：セントイリス】
【種族：人間＊ 武器：槍 制服：ニシキ】
＊：ミストレ上では「非公開」表記。
まいてつコラボキャラクター
【種族：レイルロオド 武器：魔具 制服：ニシキ】
- れいな
【種族：レイルロオド 武器：杖 制服：フレイマリン】
- オリヴィ
【種族：レイルロオド 武器：杖 制服：セントイリス】
- ニイロク
【種族：レイルロオド 武器：魔具 制服：アイゼングラート】
- ひよこ
【種族：レイルロオド 武器：杖 制服：ヴェルフォレット】
ワルロマコラボキャラクター
【種族：人間 武器：槍 制服：フレイマリン】
【種族：人間 武器：槍 制服：セントイリス】
【種族：人間 武器：剣 制服：ニシキ】
つり乙コラボキャラクター
【種族：人間 武器：魔具 制服：メトロヴェルフォレット】
【種族：人間 武器：拳 制服：メトロフレイマリン】
【種族：人間 武器：弓 制服：メトロアイゼングラート】
qureateコラボキャラクター
【種族：人間 武器：剣 制服：セントイリス】
【種族：サキュバス 武器：槍 制服：ニシキ】
- すみれ（『NinNinDays』より）
【種族：人間 武器：拳 制服：アイゼングラート】
あおかなコラボキャラクター
【種族：人間 武器：弓 制服：ヴェルフォレット】
【種族：人間 武器：弓 制服：セントイリス】
【種族：人間 武器：槍 制服：ニシキ】
【種族：人間 武器：槍 制服：フレイマリン】
花騎士コラボキャラクター
【種族：花騎士 武器：剣 制服：ヴェルフォレット】
【種族：花騎士 武器：斧 制服：フレイマリン】
【種族：花騎士 武器：剣 制服：アイゼングラート】
【種族：花騎士 武器：剣 制服：フレイマリン】
【種族：花騎士 武器：剣 制服：ヴェルフォレット】
トレインナイト達、及び特鉄隊と関わる人々
(左側のキャラ)
【種族：人間 性別：男性】
【種族：人間】
(フュッセンの右側にいるドラゴン)
【種族：ドラゴン？】
【種族：人間】
【種族：人間】
【種族：人間】
【種族：シャナ族】
【種族：竜族】
【種族：ハーフエルフ】
【種族：竜族】
【種族：シャナ族？ 所属：幻霧教】
【種族：シャナ族？ 所属：幻霧教】
【種族：獣人 所属：幻霧教】
関連サイト
キャラ名のタグ付け
キャラ名表記揺れの防止の為、キャラクター名の後に「(ミストトレインガールズ)」と付ける事を推奨したい
他作品の地名やキャラクター名と被りがちな「フォンテーヌ」や「ホノルル」などなどには必須となるだろう。
関連タグ
セントイリス アイゼングラート ニシキ ヴェルフォレット フレイマリン
似た立ち位置？のキャラクター
花騎士（フラワーナイトガール）、星騎士（ティンクルスターナイツ）：同じくFANZAGAMES及びクリエイティブチームくまさんにおける「騎士（ナイト）」の名を冠するヒロインたち。それぞれ読みは「フラワーナイト」、「スターナイト（せいきし）」であり、主人公が率いている（この手のゲームの）お約束的な存在である。上記の通り花騎士はコラボで共演した。
DENCO(H)、EKICO(H)（でんこ、えきこ）：同じく地名・駅名を名字の由来とした、ステーションメモリーズ!のキャラクター群。ただしあちらは全て（コラボキャラは本人をモチーフにした）小型のヒューマノイド（ガイノイド）であり、デザインモチーフは列車や気動車などの鉄道車両。トレインナイトの名前と名字が同じ（ないし旧新名で一致する）でんこも何体かいる。えきこは駅舎をモチーフにしたヒューマノイドである。
空間鉄道警備隊(SDF)と空間装甲擲弾兵(SPG)：「列車に乗って現場へ急行する戦闘部隊」という点ではトレインナイトたち特鉄隊に似た存在である銀河鉄道物語に登場する銀河鉄道の安全を守る組織。幻霧の中を走れる以外は普通の列車とほぼ大差ないミストトレインに乗る特鉄隊に対し、彼らSDF及びSPGは戦争レベルの事態に対応可能な武装や戦闘機などを載せた武装列車(その中の代表車両)に乗っている。
ちなみにSDFの小隊の中には女性隊員のみで構成された小隊が存在する。
