概説
CV：ささきのぞみ
『禁書』では妹達(シスターズ)編より、『超電磁砲』では欠陥電気(レディオノイズ)編より登場。
御坂美琴と瓜二つの外見をしているが実妹ではなく、美琴のDNAマップを元に製造されたクローン集団「妹達（シスターズ）」の一人。本来の名称（というべきなのか）は「検体番号一〇〇三二号」。美琴と上条当麻に救われる前までは自分の存在を「実験動物」と称していた。
妹達の中では最も上条当麻と接触している個体で、「御坂妹」という呼称は彼女と接した上条当麻が付けたもの。
美琴のように電子線を肉眼で見ることが出来ないため、専用のゴーグルをつけている。
これは他の妹達も同様で、個体によっては突撃銃や狙撃銃を所持している者もいる。
美琴がエヴァで言うアスカ(ツンデレ)なら、御坂妹はレイ(クーデレ)に例えられる存在。
ただし無表情ではあるが無感情ではなく、オリジナルである美琴に似て短気な一面や小動物を可愛がる姿が見受けられる。
一人称は「ミサカ」。美琴のことは「お姉様」と呼ぶ。
語尾に｢と、ミサカは～(細かい説明)に・・・(動詞)します｣と付ける。
（他の妹達も同様）
美琴とは違い短パンは穿いておらず、ちょっとした動作でパンチラする。
しかも縞パン。
ちょうど彼女の実験中に上条当麻が介入し、自分を含む妹達の未来を救ったため、上条当麻に恋愛感情を抱いており、美琴の前でそれらしい明言をしている。
そして上条当麻から唯一プレゼント（ペンダント）を貰っている。
イラスト
