マリオ
ルイージ
ピーチ姫
デイジー姫
ワリオ
ワルイージ
ヨッシー
キャサリン
キノピオ:プレイヤーが操作するのは赤い模様である。
ノコノコ:マリオパーティシリーズには何度も登場するが、今作で初めてプレイアブル化。
ヘイホー:隠しキャラクターで、マリオパーティシリーズでは初のプレイアブル化。ストーリーモードではクッパの手先として登場。最初からは使えない。
カメック:こちらも隠しキャラクターで、マリオパーティシリーズでは初のプレイアブル化。ヘイホーと同じく、ストーリーモードではクッパの手先として登場。最初からは使えない。

NPC

クッパ:お馴染み今作の黒幕。ストーリーモードでは手下として2体のキャラクターを呼び出す。
クッパJr.:クッパの一人息子。過去作のミニクッパのポジションを務める他、道中でマリオたちにミニゲームで勝負をしかけてくる。
ドンキーコング:お馴染みお助けキャラ。今作では隠しボードマップで登場する。
ディディーコング:ドンキーコングの相棒。『マリオパーティDS』に続いてシリーズに登場するのは今作で2度目となる。
ハンマーブロス&ファイアブロス:バトルミニゲームマスを踏むことで登場し、ハンマーブロスは全員からリトルスターを3個ずつ徴収してからそれを奪い合わせ、ファイアブロスはビリのリトルスター10個を上位プレイヤーに分け与えるというものとなっている。
パックンフラワー:アンラッキーマスに登場。赤い土管から出現してキャプテンをシャドウスターマスが配置されたエリアに連れていく。ミニゲーム「かっ飛びキラージェット」、「ドタバタお花畑」、後述するハナチャンのバトルミニゲームにも登場する。
ボム兵:ダイナマイトファクトリーに登場。危険標識を通り過ぎると乗り物に乗り込み、その状態で合計10マス進むとその時キャプテンになっているプレイヤーのリトルスターを半分没収する。
テレサ:ホラーキャッスルに登場し、絵の前を通りすぎると出現。プレイヤーの行動が終わる度に3マスずつ移動し、追い付かれるとリトルスターを半分没収される。追い付かれてない状態で外に出ると閉じ込めることが出来る。
チュウチュウ:同じくホラーキャッスルのキャプテンイベントに登場。プレイヤー全員からリトルスターを2個ずつ盗み、巣穴に逃げられるまでに捕獲する内容となっている。
リフトン&ホージロー:共にトレジャーオーシャンに登場。リフトンはプレイヤーが行動する度に2マス移動し、追い付くとリトルスター5個獲得。逆にホージローは4マスずつ移動し、追い付かれると半分没収される。ステージ前半にて交互に登場する他、リフトンはミニゲーム「リフトンライド」でも登場する。
フィッシュボーン:同じくトレジャーオーシャンに登場。キャプテンイベントに登場し、アンラッキーマスを踏んだプレイヤーのリトルスターを奪いに来る。
カニボー:同じくトレジャーオーシャンに登場。大砲でリトルスターとシャドウスターを交互に発射し、マップ状に配置する。
メカクッパ:クッパコロニーのキャプテンイベントに登場。「ハートコロニー」にて参加者が不足していると飛び入り参加する。ミニゲーム「メカクッパからにげろ！」でも登場する。

ボスキャラクター

ジュゲム&ハナチャン:アドベンチャーロード担当で、クッパ曰く『たよれるヤツら』。バトルミニゲームはアクション系。
バッタン&ボムキング:ダイナマイトファクトリー担当で、クッパ曰く『恐ろしい手下』。バトルミニゲームは駆け引き系。
カロン&キングテレサ:ホラーキャッスル担当で、クッパ曰く『恐怖の手下』。バトルミニゲームはどちらも頭を使うもので、カロンは記憶力、キングテレサはパズル力を試される。尚、カロンは「にげこめ！マンホール」、「いせきでオニゴッコ」にも登場している。
プクプク&ゲッソー:トレジャーオーシャン担当で、クッパ曰く『イカした手下』。バトルミニゲームはシューティング系。尚、プクプクは「わくぐりプクプク」と「プクプクをつりあげろ！」にて通常サイズの個体が登場している。
ガボン&ワンワン:パニックボルケーノ担当で、クッパ曰く『とっておきの手下』。ガボンは『かくれた実力者』、ワンワンは『カワイイ手下』とも呼ばれている。バトルミニゲームは早押し系。